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pcr常见辅料的质检

辅料的质检应结合实际工作中可能用到的场景，并非越苛刻越好，需要每个实验室结合自身情况来设计和调整文中提到的参数。

1.离心管

（1）渗漏密闭性：将n个离心管加入半量墨汁，盖好盖子后放入水中，浸泡30min，没有墨汁渗出为合格。

（2）离心密闭性：将n个离心管加入半量纯水，放入离心机，10000 rpm，30min，管盖未崩开未漏液为合格。

（3）热密闭性：将n个离心管加入半量纯水，盖好盖子称重后放入金属浴中，65℃或90℃（巴氏消毒），30min，再进行称重，离心管未变形，管盖未崩开未漏液，前后重量未变化为合格。

（4）冷密闭性：将n个离心管加入半量纯水，放入-20℃冰箱，24h，离心管未变形，管盖未崩开未漏液为合格。

（5）污染物质检：将n个离心管分别加入半量阴性纯水，盖好盖子涡旋1 min后静置5min，吸取纯水作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格。

（6）***物质检：将n个离心管分别加入弱阳性质控物,室温静置5min，然后进行提取;RNA核酸，DNA核酸，室温静置5min，作为模板进行扩增，qPCR扩增未被***为合格。

PCR实验室的潜在污染来源

①临床标本中存在的大量待测微生物或待测靶核酸

②科研中得到的质粒

③以前分析研究的特定微生物或靶核酸

④大量存在于实验环境中的特定微生物或靶核酸

⑤以前扩增产物的残留污染,这也是 PCR 实验室产生的将造成假阳性的“污染”。

PCR扩增可以引起实验室中扩增产物的累积,通常一次典型的PCR

扩增可以产生109拷贝的靶序列,如果气溶胶化,甚至的气溶胶都会含有106拷贝的扩增产物。如果不加以控制,在短期内累积的气溶胶化的扩增产物即会污染实验室中的***、仪器设备和通风系统,从而造成严重的实验室“污染”,出现大量的假阳性结果。

pcr实验室空气流向

PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为了避免各个实验区域间的可能性，通风方式应为机械通风，不应自然通风，且不宜使用循环风。同时要严格控制送、排风比例以保证各试验区的压力要求。PCR实验室的空气流向应按照***储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区进行，防止扩增的产物顺空气气流进入扩增前的区域。可选择负压排风装置，区域相对于相邻区域压不小于-10Pa。也可通过安装排气扇或者其他方式实现。PCR实验室要求温度18~26℃，相对湿度30%~70%。